qPCR每次都要做内参的原因在于，qPCR主要是通过测定样品中某个模板的起始量ct值来反映其DNA水平。然而，由于在实验过程中存在加样误差、各孔温度差等影响，以及DNA提取等步骤的效率有所不同，每个样本的Ct值并不能真实反映每个样品中初始模板的绝对量。这使得我们无法对不同处理的样本进行分析评价。

因此，需要一个参考标准对每一个样本进行校正，排除其他无关因素带来的的影响。这个参考标准就是内参。通过做内参，可以校正不同样本间的实验误差，使结果具有可比性。因此，每次进行qPCR实验时，都需要做内参，以便更准确地比较不同样本间的基因表达水平。